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逆转录混样
qPCR 排版混样
qPCR 数据分析
绝对定量PCR
序列分析
引物分析
序列处理
ORF 查找
翻译
配液计算
实验定时器

① 输入原始数据输入

从 Excel/WPS 或仪器导出中选中数据区 Ctrl+C 粘进来。三列:样品 / 基因 / Cq(Ct)。支持带表头、制表/逗号/分号分隔、Undetermined 自动识别。同一样品名多行=技术复孔(自动平均);不同样品=生物学重复。
⚠ 列顺序务必是:第 1 列 样品 → 第 2 列 基因 → 第 3 列 Cq(Ct)。放反(样品/基因互换)会把内参、目的基因算反;解析后可在预览里「一键交换」纠正。
—— 或 · 分列粘贴(Excel 里 3 列不相邻时,一列一列粘;与上方整块粘贴二选一)——
样品
基因
Cq(Ct)

② 生物学分组 与 内参基因设置

绝对定量 PCR

从双链 DNA 标准品的分子量与质量浓度出发，生成连续稀释标准曲线；录入 qPCR Ct 后，回算待测样本原液的目标序列拷贝数。复杂换算由软件完成，标准品工作浓度、拟合点和样本点均由您确认。

1 标准品换算2 确认工作浓度3 录入标准曲线与 NTC4 录入待测样本5 结果与质控

① 双链 DNA 标准品

分子量计算方式：
高级设置（通常无需修改）
绝大多数标准品的目标序列拷贝数保持 1。完整序列默认按线性双链、两个 5′磷酸末端计算，与 SMS2 一致；PCR 产物若使用未磷酸化引物，可选 5′-OH。手动分子量通常留空；填写正数后直接覆盖软件估算/精算值，不再额外确认，但会在页面、报告与 Excel 标明“手动覆盖”。
请输入标准品信息。
线性化提醒：若标准品为超螺旋质粒，其构象可能影响扩增表现。是否线性化需结合您的标准品设计与实验体系判断；软件只提示，不替您决定。

② 确认工作标准品浓度与连续稀释

默认采用第一步“标准品质量浓度”的换算结果；无需额外确认。若您把标准品另行稀释后再做曲线，请在上方改成稀释后的实际工作浓度。
稀释操作提醒：低浓度 DNA 容易吸附在管壁。建议标准品与待测样本使用适当且相同/匹配的 DNA Dilution Buffer，现配现用，并充分混匀后再取样；我司可提供相关支持。

③ 标准曲线 Ct 与 NTC

每个梯度先计算技术复孔均值，再参与标准曲线。左侧“纳入拟合”由您控制；删除/排除不会自动发生。Ct 可填 Undetermined。
NTC 必须设置：理想结果为 Undetermined。若出现数值 Ct，将与最低浓度且纳入拟合的标准点比较；软件按 ΔCt ≥5、3–5、<3 提供分级提示，并提醒结合扩增曲线和熔解曲线判断。

④ 待测样本

每个样本可添加任意数量的稀释点；每点填写稀释倍数、每孔模板体积和技术复孔 Ct。软件逐点回算至原液后取算术平均，是否纳入仍由您控制。
待测样本提醒：建议与标准品使用适当且匹配的 DNA Dilution Buffer。理想情况下，样本 Ct 落在标准曲线中间区域；若偏离，软件只提示可调整的稀释倍数或模板体积，不自动替您改动。
工作浓度默认继承第一步换算结果，不拦截计算；若标准品另行稀释，请先改成稀释后的实际浓度。所有排除项和原始 Ct 会保留在报告与 Excel 中。

序列输入输入

可直接粘贴序列；支持 FASTA（跳过 >标题）、GenBank/带行号、纯序列；大小写/数字/空格自动忽略。
🎛 GC 显示
🎛 重复参数
点「分析」同时刷新 GC 曲线 + 重复/对称分析

GC Content输出

高 GC（>上限） 正常带 低 GC（<下限） GC% 曲线（滑窗，画在窗口中心）

Base Composition

—

重复 / 对称序列分析输出

引物分析

输入引物或任意 DNA 序列（方向 5'→3'，非 ATCG 自动过滤）。Tm = 本公司引物算法（Breslauer 最近邻 + CE 盐条件，与设计引擎一致）。

OD 换算（配储液）

输入序列与 OD 后点「评价 / 换算」。

序列处理（反向 / 互补 / 反向互补）

非 ATCG 字符自动过滤。

DNA ⇄ RNA 互转 独立功能 · 只做 T↔U 替换，与上面反向/互补无关

非 ATCGU 字符自动过滤（RNA 用 U、DNA 用 T）。

ORF 查找（正向 + 反向）

起始默认 ATG；可勾选 GTG/TTG（细菌/线粒体常见替代起始）。终止 TAA / TAG / TGA。两条链各 3 个阅读框。找到的 ORF 输出完整 DNA + 完整蛋白。

翻译（DNA → 蛋白）

从「起始位置」整段翻译；标记起始 M / 终止 *。🔴 自起始到末尾长度必须是 3 的倍数（密码子=3 碱基），否则报错。

配液称量计算器

已知 目标浓度 + 配制体积 + 分子量 → 算需称量多少。分子量可手动输入（主路径，离线随时可算），也可填 CAS号 / 名称 点检索自动带出：先查内置常用试剂词典（离线·瞬时），词典没有再联网查 PubChem，查不到就手动填。
分段填，或整段粘贴自动拆
知道 CAS 就用①（唯一精确，**避免水合/盐型搞错**）；不知道就用②名称模糊搜。两者填了①时优先用 CAS。
g/mol ↑ 检索会自动填入，也可直接手动改/输入
· 纯度校正（一般不用动，默认 100%）
% 瓶子标 98%/99% 时填进来，称量 = 理论值 ÷ 纯度。不确定就留 100。
输入浓度、体积、分子量后点「计算称量」。摩尔浓度(M/mM/µM/nM/pM)需分子量；质量浓度(g/L、mg/mL、µg/µL、µg/mL、ng/µL、ng/mL、%)不需分子量。称量结果按 0.0001 g(万分天平)显示。

实验定时器（3 路并行）

🔊
每路可填说明（离心 / PCR…）。计时按「目标结束时刻」走 → 切到别的 Tab / 后台也不漂移、不会悄悄暂停；到点：弹窗 + 叮叮响到手动点掉 + 浏览器标签标题闪烁 +（已授权时）系统通知。⚠ 关键长等待建议把本标签留前台——浏览器若把后台标签完全冻结，冻结期间只有系统通知能弹出。
hr : min : sec
00:00:00
选中 T1
快捷起表：

逆转录混样助手 — 填 RNA 浓度和要做几管，按样本出配液单（预混以样本为单位，样本之间互不影响）

1选择逆转录方式 输入
一步法逆转录 Mix
R202 / R366
RNA ＋ 预混液 ＋ 水，一管 20 μL 直接做完。不做 gDNA 去除。
两步法逆转录 Mix
R202
先 42℃ 2 min 去基因组 DNA（16 μL），再加 RT SuperMix 到 20 μL。
试剂
每管 Total RNA ng 损耗 % 可填 10；只做 1 管不用填
2样品与 RNA 浓度 输入
样品名 RNA 浓度 ng/μL 要做几管 每管加 RNA μL 每管加水 μL
灰字只是示例，需要你自己填
3配液单 输出

qPCR 排版 & 混样准备 上机前准备

按照试剂盒说明书填参数，标 * 的为必填（均已给默认值，请按你的试剂盒/实验核对），一键出「孔板图 + 混样加样单」，可以打印后，用于加样上机。
1填写参数 输入

① 孔板与排版

② 基因与样本

③ 单孔反应配方 照试剂盒说明书填

按照 qPCR 试剂说明书填写：选反应体积、每条引物（注意浓度）加几 µL、模板加几 µL；2× 预混液和补水自动算。
= 体积一半，自动（20→10 / 10→5）
补足至反应体积，自动

④ 混样与损耗

损耗按 max(损耗%, 至少份数) 取大——两个都是下限，哪个多用哪个（例：60 孔 × 10% = 6 份，比"至少 1 份"多 → 用 6）。

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