bio-tool V10.2 在线版 — DNA 序列分析工具箱

① 输入原始数据输入

从 Excel/WPS 或仪器导出中选中数据区 Ctrl+C 粘进来。三列:样品 / 基因 / Cq(Ct)。支持带表头、制表/逗号/分号分隔、Undetermined 自动识别。同一样品名多行=技术复孔(自动平均);不同样品=生物学重复。

⚠ 列顺序务必是:第 1 列样品 → 第 2 列基因 → 第 3 列 Cq(Ct)。放反(样品/基因互换)会把内参、目的基因算反;解析后可在预览里「一键交换」纠正。

—— 或 · 分列粘贴(Excel 里 3 列不相邻时,一列一列粘;与上方整块粘贴二选一)——

样品

基因

Cq(Ct)

② 生物学分组与内参基因设置

序列输入输入

可直接粘贴序列；支持 FASTA（跳过 >标题）、GenBank/带行号、纯序列；大小写/数字/空格自动忽略。

⬆ 上传序列文件（gbk / seq / fasta / fa / gb / txt）

🎛 GC 显示滑窗正常带 % – % 平滑

🎛 重复参数正向/反向最小长度反向重复最大环(间隔) 串联最小拷贝

GC Content输出

高 GC（>上限）正常带低 GC（<下限） GC% 曲线（滑窗，画在窗口中心）

Base Composition

—

重复 / 对称序列分析输出

引物分析

输入引物或任意 DNA 序列（方向 5'→3'，非 ATCG 自动过滤）。Tm = 本公司引物算法（Breslauer 最近邻 + CE 盐条件，与设计引擎一致）。

OD 换算（配储液）

OD 量（X，OD₂₆₀ units）储液浓度（µM）

输入序列与 OD 后点「评价 / 换算」。

序列处理（反向 / 互补 / 反向互补）

非 ATCG 字符自动过滤。

DNA ⇄ RNA 互转独立功能 · 只做 T↔U 替换，与上面反向/互补无关

非 ATCGU 字符自动过滤（RNA 用 U、DNA 用 T）。

ORF 查找（正向 + 反向）

起始默认 ATG；可勾选 GTG/TTG（细菌/线粒体常见替代起始）。终止 TAA / TAG / TGA。两条链各 3 个阅读框。找到的 ORF 输出完整 DNA + 完整蛋白。

ATG GTG TTG 最小长度(氨基酸)

翻译（DNA → 蛋白）

从「起始位置」整段翻译；标记起始 M / 终止 *。🔴 自起始到末尾长度必须是 3 的倍数（密码子=3 碱基），否则报错。

起始位置(1-based) 用反向互补链

配液称量计算器

已知 目标浓度 + 配制体积 + 分子量 → 算需称量多少。分子量可手动输入（主路径，离线随时可算），也可填 CAS号 / 名称 点检索自动带出：先查内置常用试剂词典（离线·瞬时），词典没有再联网查 PubChem，查不到就手动填。

① CAS号唯一精确 · 推荐 – – 分段填，或整段粘贴自动拆

② 名称模糊搜索

知道 CAS 就用①（唯一精确，**避免水合/盐型搞错**）；不知道就用②名称模糊搜。两者填了①时优先用 CAS。

分子量 MW g/mol ↑ 检索会自动填入，也可直接手动改/输入

目标浓度配制体积

· 纯度校正（一般不用动，默认 100%）

试剂纯度 % 瓶子标 98%/99% 时填进来，称量 = 理论值 ÷ 纯度。不确定就留 100。

输入浓度、体积、分子量后点「计算称量」。摩尔浓度(M/mM/µM/nM/pM)需分子量；质量浓度(g/L、mg/mL、µg/µL、µg/mL、ng/µL、ng/mL、%)不需分子量。称量结果按 0.0001 g(万分天平)显示。

实验定时器（3 路并行）

🔊

每路可填说明（离心 / PCR…）。计时按「目标结束时刻」走 → 切到别的 Tab / 后台也不漂移、不会悄悄暂停；到点：弹窗 + 叮叮响到手动点掉 + 浏览器标签标题闪烁 +（已授权时）系统通知。⚠ 关键长等待建议把本标签留前台——浏览器若把后台标签完全冻结，冻结期间只有系统通知能弹出。

hr : min : sec

00:00:00
选中 T1

快捷起表：

逆转录混样助手 — 填 RNA 浓度和要做几管，按样本出配液单（预混以样本为单位，样本之间互不影响）

1选择逆转录方式输入

一步法逆转录 Mix

R202 / R366

RNA ＋预混液＋水，一管 20 μL 直接做完。不做 gDNA 去除。

两步法逆转录 Mix

R202

先 42℃ 2 min 去基因组 DNA（16 μL），再加 RT SuperMix 到 20 μL。

试剂 R202 5 × RT SuperMix R366 5 × RedTrack RT SuperMix 红色示踪 · 配蓝色 Q488 变紫防漏加

每管 Total RNA ng 损耗 % 可填 10；只做 1 管不用填

2样品与 RNA 浓度输入

	样品名	RNA 浓度 ng/μL	要做几管	每管加 RNA μL	每管加水 μL

灰字只是示例，需要你自己填

3配液单输出

qPCR 排版 & 混样准备上机前准备

按照试剂盒说明书填参数，标 * 的为必填（均已给默认值，请按你的试剂盒/实验核对），一键出「孔板图 + 混样加样单」，可以打印后，用于加样上机。

本次实验名称（选填；用作 PNG / Excel 下载文件名和打印标题。例：20260701-张三-说明）

1填写参数输入

① 孔板与排版

孔板类型 *

排版方向（行/列谁先用完）

部分使用 （板子上次没用完、只用剩余孔时勾上；默认整板可用，勾上后在下面把用过的孔标掉）

② 基因与样本

基因数 * （下面填了名字则以名字为准）基因 / 引物对名字（选填，每行一个，可粘贴一列；留空自动 Gene 1、Gene 2…）

样本数 * （下面填了名字则以名字为准）样本名字（选填，每行一个，可粘贴一列；留空自动样本1、样本2…）

复孔重复 / 操作重复 *

③ 单孔反应配方照试剂盒说明书填

按照 qPCR 试剂说明书填写：选反应体积、每条引物（注意浓度）加几 µL、模板加几 µL；2× 预混液和补水自动算。

反应体积 µL *

2× 预混液 µL= 体积一半，自动（20→10 / 10→5）

引物储液 µM *

每条引物 µL（F/R 各）*

模板 µL *

ddH₂O µL补足至反应体积，自动

④ 混样与损耗

混样策略（预混液放哪份）

损耗 % *

至少多配份 *

每个基因加 NTC 无模板对照

损耗按 max(损耗%, 至少份数) 取大——两个都是下限，哪个多用哪个（例：60 孔 × 10% = 6 份，比"至少 1 份"多 → 用 6）。

① 输入原始数据输入

② 生物学分组 与 内参基因设置

③ 结果交付输出

序列输入输入

GC Content输出

Base Composition

重复 / 对称序列分析输出

引物分析

OD 换算（配储液）

序列处理（反向 / 互补 / 反向互补）

DNA ⇄ RNA 互转 独立功能 · 只做 T↔U 替换，与上面反向/互补无关

ORF 查找（正向 + 反向）

翻译（DNA → 蛋白）

配液称量计算器

实验定时器（3 路并行）

逆转录混样助手 — 填 RNA 浓度和要做几管，按样本出配液单（预混以样本为单位，样本之间互不影响）

qPCR 排版 & 混样准备 上机前准备

① 孔板与排版

② 基因与样本

③ 单孔反应配方 照试剂盒说明书填

④ 混样与损耗

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② 生物学分组与内参基因设置

DNA ⇄ RNA 互转独立功能 · 只做 T↔U 替换，与上面反向/互补无关

qPCR 排版 & 混样准备上机前准备

③ 单孔反应配方照试剂盒说明书填